Injection d’un vecteur viral dans la moelle épinière d’un rat pour le traçage neuronal rétrograde

Résumé

Source : Keefe, K. M., et al. L’injection directe d’un vecteur lentiviral met en évidence plusieurs voies motrices dans la moelle épinière du rat. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo démontre l’injection d’un vecteur viral de transport rétrograde à haut rendement (HiRet) dans la moelle épinière du rat pour tracer les voies neuronales. Le virus possède des glycoprotéines pour l’entrée synaptique et un gène codant pour une protéine fluorescente. L’aiguille est insérée dans la moelle épinière et la suspension du virus est administrée à un rythme contrôlé. L’aiguille est finalement retirée après avoir laissé suffisamment de temps pour la diffusion virale.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparations pré-chirurgicales

1. Préparez des aiguilles de verre tirées pour l’injection virale quelques jours avant l’intervention chirurgicale à l’aide de pipettes capillaires en verre de 3,5 nanolitres conçues pour les injecteurs de nanolitres. Tirez chaque pipette sur un extracteur d’aiguille en deux étapes selon les instructions du fabricant pour créer des gabarits à deux aiguilles.
2. Affinez la pointe de l’aiguille en coupant environ 1 à 2 mm de verre en excès avec des micr....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
#10 Lames de scalpel	Roboz	RS-9801-10	À utiliser avec le scalpel.
Seringues de 1 ml	Becton, Dickinson and Company	309659	Pour l’injection IP d’anesthésique, les injections de rappel d’anesthésique potentielles et les injections d’antibiotiques.
Seringues de 10 ml	Becton, Dickinson and Company	309604	Pour injecter une solution saline à l’animal, après l’opération.
4.0 Suture Catgut chromique	DemeTECH	NN374-16	Pour relier le muscle lors de la fermeture.
48000 Micropipette Beveler	World Precision Instruments	32416	Utilisé pour biseauter les pointes des tubes capillaires en verre tirés pour former des aiguilles en verre fonctionnelles.
Solution d’iode à 5 %	Purdue Products L.P.	L01020-08	Pour une utilisation dans la stérilisation du site chirurgical.
70 % Éthanol	N/A	N/A Pour	la stérilisation des aiguilles de verre nouvellement préparées, des modèles animaux pendant la préparation chirurgicale et des mains du chirurgien pendant l’opération, ainsi que tous les autres maintenances mineures de stérilité.
Anesthésique (solution de kétamine/xylazine)	Zoetis	240048	Pour maintenir l’animal dans le bon plan de conscience pendant la chirurgie.
Antibiotique (Cefazolin)	West-Ward Pharmaceuticals	NPC 0143-9924-90	À injecter par voie sous-cutanée pour prévenir l’infection post-opératoire.
Stérilisateur à billes	CellPoint	5-1450	Pour stériliser à chaud les instruments chirurgicaux.
Bonewax	Fine Science Tools	19009-00	Pour sceller l’os en cas de saignement osseux.
Cautériseur	Outils scientifiques fins	18010-00	Pour sceller toutes les artères ou veines sectionnées lors d’une intervention chirurgicale afin d’éviter une perte de sang excessive.
Balance numérique	Okaus	REV.005	Pour peser l’animal pendant la préparation chirurgicale.
Accessoire d’aiguille flexible	World Precision Instruments	MF34G-5	Pour nettoyer les aiguilles de verre et charger de l’huile rouge dans les aiguilles de verre.
Gelfoam	Pfizer	H68079	Pour sceller l’os en cas de saignement osseux.
Tubes capillaires en verre	World Precision Instruments	4878	Pour les aiguilles en verre tirées - doit être conçu pour les injecteurs de nanolitres.
Tondeuse à cheveux	Oster	111038-060-000	Pour dégager le site chirurgical des cheveux.
Hémostats	Roboz	RS-7231	Pour un usage général en chirurgie.
Kimwipes	Kimtech	34155	Pour un usage général en chirurgie.
Pince incurvée à pointe moyenne	Roboz	RS-5136	Pour une utilisation générale en chirurgie.
Micromanipulateur avec échelle Vernier	Kanetec	N/A	Pour un ciblage précis pendant l’opération.
Microciseaux	Roboz	RS-5621	Pour couper le verre s’échappe des tubes capillaires en verre fraîchement tirés.
Microscope avec échelle de lumière et de vernier Oculaire	Leitz Wetzlar	N/A	Utilisé pour visualiser et mesurer le biseautage des tubes capillaires en verre tiré en aiguilles de verre fonctionnelles.
Contrôleur de pompe à microseringue	World Precision Instruments	62403	Pour contrôler le taux d’injection.
Nanoliter 2000 Pompe Tête Injecteur	World Precision Instruments	500150	Pour charger et injecter le virus de manière contrôlée.
Extracteur d’aiguille	Narishige	PC-100	Pour chauffer et séparer les tubes capillaires en verre afin de former des aiguilles en verre.
Pommade ophtalamique	Dechra Veterinary Products	RAC 0119	Pour protéger les yeux de l’animal pendant la chirurgie.
Parafilm	Bemis	PM-996	Pour aider au chargement du virus dans le nano-injecteur.
Aiguilles PrecisionGlide (25G x 5/8)	Becton, Dickinson and Company	305122	À utiliser avec les seringues de 1 ml et 10 ml pour permettre l’injection du modèle animal.
Pince à dents de rat	Roboz	RS-5152	Pour la préhension des apophyses épineuses.
Red Oil	N/A	N/A	Pour fournir une façade permettant de visualiser le virus pénétrant dans les tissus pendant l’injection.
Enrouleurs	Roboz	RS-6510	Pour maintenir ouverte la plaie chirurgicale.
Comprimés Rimadyl	Bio Serv	MP275-050	Pour la gestion de la douleur après l’opération.
Rongeurs	Roboz	RS-8300	Pour enlever du muscle de la colonne vertébrale pendant la chirurgie.
Poignée de lame de scalpel	Roboz	RS-9843	Pour trancher la peau ouverte et le coussinet adipeux d’un modèle animal pendant la chirurgie.
Ciseaux	Roboz	RS-5980	Pour une utilisation générale en chirurgie.
Clips de plaie en acier inoxydable	CellPoint	201-1000	Pour lier la peau de la plaie chirurgicale lors de la fermeture.
Pince pour dégrafage	Kent Scientific	INS750347	Pour retirer les agrafes, si elles sont mal appliquées.
Tissu stérile	Phenix Research Products	BP-989	Pour fournir une surface stérile pour l’opération.
Applicateurs stériles à embout de coton	Puritan	806-WC	Pour absorber le sang dans la plaie chirurgicale tout en maintenant la stérilité.
Gaze stérile	Covidien	2146	Pour nettoyer la zone chirurgicale et les outils chirurgicaux tout en maintenant la stérilité.
Saline stérile	Baxter Healthcare Corporation	281324	Pour une utilisation dans la purification du sang et pour le remplacement des fluides après la chirurgie.
Gants chirurgicaux	N/A	N/A	: Pour une utilisation par le chirurgien pour maintenir le champ stérile pendant l’opération.
Coussin chauffant chirurgical	N/A	N/A	Pour maintenir la température corporelle du modèle animal pendant l’opération.
Microscope chirurgical	N/A	N/A	Pour une meilleure visualisation de la plaie chirurgicale.
Agrafeuse chirurgicale	Kent Scientific	INS750546	Pour appliquer les agrafes.
Pompe à eau de thérapie thermique T/Pump	Gaymar	TP500C	Pour pomper de l’eau chaude dans le coussin chauffant à convection d’eau.
Coussin chauffant par convection d’eau	Baxter Healthcare Corporation	L1K018	À utiliser dans la zone de récupération post-opératoire pour maintenir la température corporelle de l’animal inconscient.
Crochets lestés	N/A	N/A	Pour maintenir ouverte la plaie chirurgicale.